DNA electroforese

Geladen moleculen, zoals DNA, kunnen op grootte gescheiden worden met behulp van agarosegel-elektroforese.

De scheiding is afhankelijk van de volgende factoren:

- grootte van het DNA,

- nucleotide samenstelling,

- dichtheid van de agarose (concentratie agarose in gel),

- voltage (V/cm gel),

- keuze elektroforesesysteem.

Er zijn verschillende elektroforesesystemen met horizontale of verticale gels; echter m.b.t. agarosegel-elektroforese wordt hoofdzakelijk de horizontale submarine methode (met een bufferoplossing op de gel) gebruikt. Wij gaan gebruik maken van horizontale electroforese. De afmeting van de gel kan verschillen naar gelang het doel van de elektroforese bv. de controle van restrictie-enzym analyse of de isolatie van een DNA fragment. Men kan de grootte van de DNA fragmenten (in kb = kilo baseparen) bepalen door op semi-log papier de log van lambda DNA fragmenten uit te zetten tegen de reciproke R_f waarden van de bijbehorende migratie afstanden. Vervolgens kan men m.b.v. de reciproke R_f waarde(n) van de te onderzoeken DNA fragment(en) op de log schaal de log waarde(n) van de DNA-fragmenten aflezen; de anti-log waarde bepaald de grootte (in kb).